抗体验证指南 2016

据估计，因抗体质量不佳，生命科学领域每年的损失达到8亿美元。同时，这也造成了无数的实验失败，浪费了宝贵的样本和科学家的青春。尽管科学界已经意识到这个问题，但目前仍然缺乏抗体验证的整体框架。

为了刺激研究界实现更高标准的抗体重复性，国际抗体验证工作组（IWGAV）近日出台了一套指南。这些指南发表在9月5日的《Nature Methods》杂志上，强调了抗体验证需要针对应用和背景来开展。

这篇题为“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的数名成员发表的，包括工作组主席、瑞典皇家理工学院的微生物学教授Mathias Uhlén。文章提出了五点，以指导特定应用中的抗体验证。

•遗传策略：测定对照细胞或组织中的相关信号，这些对照中的目标基因已利用CRISPR或RNAi等技术敲除或敲低。

•正交策略：利用不依赖抗体的方法定量多个样品，然后检查依赖抗体和不依赖抗体这两种定量之间的相关性。

•独立抗体策略：利用两个或更多的独立抗体来识别目标蛋白上的不同表位，再通过比较和定量分析来确认特异性。

•表达标记蛋白：修饰内源的目标基因，增加亲和标签或荧光蛋白的序列。标记蛋白的信号可与基于抗体的检测相关联。

•免疫捕获加上质谱分析：将免疫捕获与MS分析相结合，以确定与纯化的抗体直接作用的蛋白质，以及可能与目标蛋白形成复合物的蛋白质。

这篇文章还对生产商和使用者提出建议，以确保长期的抗体重复性。作者们建议使用者在自己特定的应用或样品中，至少运用上面的一种策略来开展验证。同时，他们还建议使用者按照一定的形式报告，包含货号、批号和RRID（研究资源标识符），以确保研究中使用的任何抗体可被明确识别。

同时，作者们也向生产商提出了类似的建议，至少运用一种策略来验证，并提供尽可能多的抗体信息，如鉴定检测中的抗体浓度、细胞提取物的浓度、抗体生产所用的免疫原、抗体-表位的亲和力、缓冲液配方等。

“这篇文章迈出了重要的第一步，有望制定出广泛接受的抗体验证标准，确保生命医学研究使用高质量且一致的抗体，”Uhlén博士表示。“我们期待抗体用户、出版商、资助机构和生产商的反馈，以帮助加强这个初步建议，并确保这些基本工具的可靠性。”

原始出处：

Uhlen M, Bandrowski A, Carr S, Edwards A, Ellenberg J, Lundberg E, Rimm DL, Rodriguez H, Hiltke T, Snyder M, Yamamoto T. A proposal for validation of antibodies. Nat Methods. 2016 Sep 5. doi: 10.1038/nmeth.3995