有汗型外胚层发育不良胚胎植入前遗传学检测１例

患者,女,出生时全身无体毛､睫毛及头发,双手及双脚皮肤过度角化,指甲发育不良,无汗毛孔,正常排汗｡有汗型外胚层发育不良(hidroticectodermaldysplasia,HED)家族史,基因型为GJB6(NM_006783.4,c.263C>T杂合突变,p.A88V)｡2014年结婚,婚后同居生活,性生活正常,2016年孕5月行产前诊断,因胎儿为受累胎儿而引产｡2017年来院要求行胚胎植入前遗传学检测(PGT)｡

抽取患者夫妇及患者父母外周血,提取DNA,高通量测序｡以GJB6基因(NM_006783.4chr13:20796101-20806534反向转录)编码区及外显子-内含子交界为目标区域,并在基因上下游选择若干单核苷酸多态性(SNP)位点作为遗传标记,检测SNP位点基因型,选择其中相应位点构建单体型,进行连锁分析｡采用短效长方案进行促排卵,获得的卵子采用卵胞浆内单精子注射(ICSI)方式人工授精,胚胎培养,发育到囊胚时活检4~10个滋养层细胞,活检后的胚胎采用玻璃化冷冻法进行冷冻保存｡对活检的滋养层细胞采用多重置换扩增方法(MDA)进行全基因组扩增｡采用高通量测序技术,对染色体非整倍体､微缺失､微重复进行检测,分辨率为4Mb｡以GJB6基因编码区为目标区域,并在基因上下游选择若干SNP位点作为遗传标记,检测SNP基因型,选择其中相应位点构建单体型｡采用一代测序技术对致病变异位点进行验证｡选择正常胚胎行复苏移植｡妊娠16~18周抽取羊水进行一代测序验证｡通过SNP连锁成功构建了单体型｡患者促排获得了3个卵子,ICSI后均正常受精,2个胚胎发育到囊胚,进行活检｡1枚胚胎非整倍体检测结果异常,1枚胚胎非整倍体检测结果正常｡对非整倍体结果正常的胚胎进行单体型分析,结果正常｡进行一代验证,结果正常,证明胚胎未携带致病变异(具体检测结果见表1)｡

表1胚胎检测结果

胚胎移植后第14天血HCG值为359U/L,4周见胎心､胎芽,获得临床妊娠｡妊娠16周抽取羊水,产前诊断结果显示胎儿未携带致病变异｡妊娠40+2周,剖宫产获得一名女婴,体重3200g,体检未见明显异常｡

讨论

人体皮肤由胚胎的两个胚层发育而来,其中外胚层发育成表皮及附属器官｡外胚层发育不良可导致外胚层来源的组织结构或功能异常｡HED(OMIM129500)为一种常染色体显性遗传病[1],临床表现主要为毛发缺陷､甲营养不良和掌跖角化三联征,这些症状会对患者的身体和心理造成严重的不良影响[2-4]｡该病的致病基因为GJB6(gapjunctionbeta6),编码缝隙连接蛋白Cx30｡Cx30为一种缝隙连接通道蛋白,其变异可引起多种皮肤和其他器官的疾病[5-6]｡目前发现的GJB6致病变异有4种,包括G11R､V37E､D50N和A88V,这4种变异都会造成氨基酸替换[7]｡本病例中的患者经检测即为p.A88V变异｡研究表明,p.A88V的改变可以使角质形成细胞内的ATP渗出到细胞外的基质中,ATP水平增高作为一个旁分泌信号可促进角质形成细胞的增生和分化,从而引起HED的相应临床表现[8]｡

常染色体显性遗传病行产前诊断有一半的患者要行流产或引产,会对孕妇及家庭带来极大的伤害｡近年来随着辅助生殖技术的发展,PGT技术逐渐应用｡PGT使用分子遗传学技术,在体外培养的胚胎阶段即可获得胚胎的遗传特性,然后挑选不携带已知致病变异的胚胎移植｡本病例采用PGT技术成功阻断了1例HED患者的垂直传递,帮助患者家庭生育了一名健康的孩子,对家庭和社会都具有非常大的意义｡

参考文献略｡

原始出处:

王喜良，郝冬梅，张金艳，侯开波,有汗型外胚层发育不良胚胎植入前遗传学检测１例[J],生殖医学杂志,2020，3（29）.